抗生素微生物检定法

抗生素微生物检定法

微生物 胡梦莹

抗生素微生物检定法是国际上通用的、经典的抗生素效价测定方法。自20世纪40年代建立至今，在各国药典中被普遍采用。虽然伴随着HPLC等化学分析技术的发展，一些抗生素品种的效价测定已被化学分析法所取代，但由于以下特点：

1. 微生物检定法可直观、特异地反映出抗生素药品的抗菌活性，其原理（杀菌或抑菌）与医疗要求基本一致，能直接表示抗生素对微生物（细菌、霉菌）的作用，这是其他物理学方法或化学方法所不能达到的；

2. 多组分抗生素由于不同活性组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确表征组分组成、含量和生物活性间的关系；

3. 许多抗生素品种由于各种原因目前没有适当的化学分析方法表征其活性，故抗生素微生物检定法目前在各国药典中仍占有重要的地位，且短期内化学分析法不可能完全取代微生物检定法。

抗生素微生物检定不是一门独立的学科，而是应用多种学科理论和技术的应用科学技术。一般来说，它主要应用微生物学、分析化学、生物统计学等理论与技术和抗生素方面的专业知识。故从事抗生素微生物检定对检验人员的综合能力要求较高。

抗生素微生物检定中的管碟法是我国药典收载的第一法。管碟法的特点是灵敏度高，能直接显示抗生素的抗菌效价，但操作步骤多，试验过程长，要求技术熟练、细致；影响试验结果的因素较多，需要从各个环节加以严格控制试验条件，使试验结果与真值更为接近，误差更小。管碟法是利用抗生素在摊布特定试验菌的琼脂培养基内扩散，形成一定浓度的含抗生素的球型区，抑制了试验菌的繁殖，通过透明琼脂培养基，可观察到透明的抑菌圈。并且在一定的抗生素浓度范围内，对数浓度与抑菌圈面积或直径成正比。

方法设计是在同样条件下将已知效价的标准品溶液与未知效价的供试品溶液，用管碟法表现的剂量反应（抑菌圈）进行比较；当标准品和供试品是属于同一性质的抗生素时，标准品溶液和供试品溶液，对一定试验菌所得的剂量反应曲线，在一定剂量范围内应互相平行。标准品与供试品必须是同质的抗生素，这一要求极为重要；不同质的抗生素，则使二者剂量反应曲线不平行，就不能比较二者效价的高低。同一种抗生素的组分差别以及异构体的存在多少，也可使二者反应曲线不平行。因此，标准品所含的主要抗菌成分应与供试品的主要抗菌成分是同属同质的物质。

不锈钢（或其他材料）小管，安置在摊布试验菌的琼脂培养基平板上，当小管中装入抗生素溶液后，抗生素分子随溶剂向培养基内呈放射状扩散，同时将培养基平板置培养箱中培养，琼脂培养基内的试验菌开始生长。抗生素分子在琼脂培养基中的浓度，随离开小管的距离增大而降低，离小管愈远处，琼脂培养基中抗生素的浓度愈低；当抗生素分子扩散到T时间，这时琼脂培养基中抗生素的浓度恰高于该抗生素对试验菌的最低抑菌浓度，试验菌的生长被抑制，就形成透明的抑菌圈。在抑菌圈的边缘处，琼脂培养基中所含抗生素的浓度，应为抗生素对试验菌的最低抑菌浓度。